AO/EB雙熒光染色試劑盒

AO/EB雙熒光染色試劑盒

保存條件 4℃避光保存，有效期6個(gè)月。

產(chǎn)品簡介：

吖啶橙 （Acridine Orange） 是一種熒光色素，其檢測激發(fā)濾光片波長488nm，阻斷濾光片波長515nm。它與細(xì)胞中DNA和RNA結(jié)合量存在差別，可發(fā)出不同顏色的熒光，與DNA結(jié)合量少發(fā)綠色熒光，與RNA結(jié)合量多發(fā)桔黃色或桔紅色熒光。該染料具有膜通透性，能透過細(xì)胞膜，使核DNA和RNA染色。溴化乙錠 （Ethidium?Bromide, EB） 僅能透過胞膜受損的細(xì)胞，嵌入核DNA，發(fā)橘紅色熒光。凋亡的細(xì)胞呈現(xiàn)為染色增強(qiáng)，熒光更為明亮，均勻一致的圓狀或固縮狀、團(tuán)塊狀結(jié)構(gòu)。非凋亡細(xì)胞核呈現(xiàn)熒光深淺不一的結(jié)構(gòu)樣特征，二者很容易在熒光顯微鏡下判別。在熒光顯微鏡下觀察，可見四種細(xì)胞形態(tài)：1. 活細(xì)胞（VN），核染色質(zhì)著綠色均勻熒光并呈正常結(jié)構(gòu)；2. 早期凋亡細(xì)胞（VA），核染色質(zhì)著綠色呈固縮狀或圓珠狀；3. 晚期凋亡細(xì)胞（NVA），核染色質(zhì)為橘紅色并呈固縮狀或圓珠狀；4. 非凋亡的死亡細(xì)胞（NVN），核染色質(zhì)著橘紅色并呈正常結(jié)構(gòu)。因EB只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光，由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。本產(chǎn)品AO、EB 溶液濃度為100ug/ml，所含穩(wěn)定劑不影響實(shí)驗(yàn)效果。

AO/EB雙熒光染色試劑盒

使用方法：

1.  使用前先根據(jù)用量，將AO 溶液和EB 溶液按1:1 混合成工作液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

2.  對于貼壁細(xì)胞或爬片，去掉培養(yǎng)基，用PBS 洗兩遍去除殘余培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞，加入新的PBS；如果需要觀察全部細(xì)胞特性，保留未貼壁細(xì)胞，可以直接在培養(yǎng)基中加入工作液。按照每毫升培養(yǎng)基或PBS 中加入20ul 工作液即可。室溫放置2-5min 后于熒光顯微鏡下觀察。

3.  對于懸浮細(xì)胞，可直接加入工作液或離心收集細(xì)胞后在PBS 中加入工作液。按照每毫升培養(yǎng)基或PBS 中加入20ul 工作液即可。室溫放置2-5min 后于熒光顯微鏡下觀察。

注意事項(xiàng)：

1.  含酚紅培養(yǎng)基對觀察有輕微影響。建議使用無酚紅培養(yǎng)基。

2.  染色液工作濃度和染色時(shí)間可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)情況適當(dāng)調(diào)整，以期達(dá)到最佳效果。

3.  為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服，戴手套。

4.  操作是需要避光。