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    cck8檢測試劑盒在進行檢測前需要做哪些準備工作?

    更新時間:2023-06-09  |  點擊率:1753
      cck8檢測試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗cck8檢測試劑盒抗體包被于酶標板上,實驗時樣品或標準品中的試劑盒與包被抗體結合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗cck8檢測試劑盒抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗cck8檢測試劑盒抗體與結合在包被抗體上的試劑盒結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現藍色,加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值,cck8檢測試劑盒濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標準曲線計算出樣品中試劑盒的濃度。
      cck8檢測試劑盒檢測前準備工作:
      1.請提前20分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。
      2.將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶,屬于正常現象,可用40℃水浴微加熱使結晶溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超過50℃,使用時洗滌液應為室溫)。當日使用。
      3.標準品:于10000×g離心1分鐘,加入標準品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標準品中,旋緊管蓋,靜置10分鐘,上下顛倒數次,待其充分溶解后,用移液器將其輕輕混勻(濃度為1000pg/mL)。然后根據需要進行倍比稀釋(注:不要直接在反應孔中進行倍比稀釋)。建議配制成以下濃度:按照稀釋方法圖例標準品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標準品:取0.5mL10ng/mL的上述標準品加入含有0.5mL標準品&樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度依此類推。
      4.生物素化抗體工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應多配制100-200μL。使用前15分鐘,以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作濃度。當日使用。
      5.酶結合物工作液:實驗前計算當次實驗所需用量(以100μL/孔計),實際配制時應多配制100-200μL。cck8檢測試劑盒使用前15分鐘,以酶結合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結合物(1:100)成工作濃度。
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