細胞凋亡試劑盒的使用，需要注意什么？

　　細胞凋亡與細胞壞死不同，細胞凋亡是為維持環境穩定，為更好的適應勝春環境而主動爭取的一種死亡過程，它涉及一系列基因的激活、表達以及調控等作用，是一種字體損傷的現象。

　　細胞凋亡試劑盒原理

　　細胞凋亡是細胞的基本特征之一，在機體的胚胎發育、組織修復、內環境的穩定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V是一種分子量為35.8 KD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的磷脂酰絲氨酸高親和力特異結合。FITC-Annexin V結合到凋亡細胞后，在藍色光的激發下，發出綠色熒光，區分出凋亡細胞與正常細胞。碘化丙啶是一種核酸染料，它不能穿透完整細胞膜，但對凋亡晚期細胞和死細胞的破損細胞膜能夠穿透，并使細胞核紅染。將FITC-Annexin V與PI匹配使用，可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞區分開來。

　　使用細胞凋亡試劑盒的注意事項

　　1.旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。

　　2.Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物質，在保存與操作時請注意避光。

　　3.Propidium iodide（PI）能通過皮膚吸收，對眼睛有刺激作用。

　　4.在細胞洗滌的最后一步，請盡量將上清棄凈，以免PBS殘留影響實驗結果。

　　5.PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高，建議首先進行Annexin V-FITC染色，上機前5分鐘再加入PI染色。

　　6.整個操作過程動作要盡量輕柔，勿用力吹打細胞，盡量在4℃下操作。

　　7.反應完畢后請盡快檢測，因為細胞凋亡是一個動態的過程，反應1小時后熒光強度就開始衰變。

　　8.細胞凋亡試劑盒成功的檢測凋亡受以下幾種因素的影響，如細胞類型、細胞膜上PS的密度、發生凋亡時PS翻轉的比例、誘導細胞凋亡的方法、所用試劑、誘導凋亡的時間等，把這些影響因素進行優化對實驗成功是非常必要的。